세포 배양 배지 FAQ

1. 내 세포에 적합한 배지를 어떻게 선택하나요?

기본 참조: 특정 세포주를 확립하는 데 사용되는 배지가 일반적으로 가장 우선적으로 선택됩니다. 관련 자료나 세포 공급업체를 참조하십시오.
세포 유형 및 실험에 따라:
- 마우스 세포주는 종종 배양됩니다 RPMI 1640.
- 세포 교잡, 유전자 전이 실험을 위해 IMDM 선택할 수 있습니다.
경험적 방법(권장): 다양한 배지 유형에서 세포를 배양하고 성장 곡선과 도금 효율성과 같은 지표를 사용하여 결과를 비교하여 최적의 배지를 선택합니다.
권위 있는 데이터베이스를 참조하세요. The ATCC(미국 유형 문화 컬렉션) 이 웹사이트는 권장 배지, 조건, 관련 문헌을 포함하여 대부분 세포주에 대한 자세한 배양 정보를 제공합니다.

2. 액체 매체를 -20°C에 보관할 수 있나요?

그렇지 않습니다. -20°C에서 보관하면 배지 내 염이 침전될 수 있습니다. 해동 시 이러한 염이 완전히 재용해되지 않아 삼투압이 감소할 수 있습니다. 이로 인해 세포가 파열되어 사멸할 수 있습니다.

3. 새로 준비한 액체 배지는 얼마나 오랫동안 보관할 수 있나요?

새로 준비한 배지는 다음 위치에 보관하는 것이 좋습니다. 4°C 빛으로부터 보호됨 그리고 그것을 사용하십시오 일주 이내매체가 신선할수록 더 좋습니다.

4. 혈청과 항생제를 보충한 배지를 장기간 보관할 수 있나요?

아니요. 혈청과 항생제를 신선한 배지에 첨가한 후에는 다음 기간 내에 사용해야 합니다. XNUMX ~ XNUMX 주. 일부 항생제와 혈청의 필수 성분은 해동 후 분해되기 시작합니다.

5. 냉장고에 보관한 배지가 진한 붉은색(알칼리성)으로 변하는 이유는 무엇입니까?

4°C에서 보관할 경우, CO₂가 점차 빠져나간다 배지에서 pH가 증가(알칼리성이 높아짐)합니다. pH 지시약 페놀 레드 알칼리성 조건에서는 더 진한 적자색으로 변합니다.
해결 방법 : pH는 버블링을 통해 조절될 수 있습니다. 필터 살균 CO₂ 사용 전에 매체를 통해.

6. 배지에 항생제를 첨가해야 합니까?

일반적으로 권장하지 않습니다. 미묘한 오염을 가리거나 세포에 세포독성 효과를 미치는 것을 방지하기 위해 일상적인 배양에는 항생제를 첨가해서는 안 됩니다.
예외 : 세균/곰팡이 오염을 방지하기 위해 페니실린-스트렙토마이신(Pen-Strep) 추가할 수 있습니다. 일반적인 최종 농도는 100 U/mL 페니실린과 100 µg/mL 스트렙토마이신입니다.

7. 혈청 무첨가 배양의 경우 항생제 농도를 조절해야 합니까?

네, 금액을 줄이세요. 항생제 농도는 다음과 같이 감소되어야 합니다. 적어도 50 % 혈청 함유 배지에서 사용된 농도와 비교했을 때. 혈청 단백질은 일부 항생제에 결합하여 불활성화시킵니다. 이러한 불활성화는 혈청이 없는 조건에서는 일어나지 않습니다.

8. 일부 실험에는 페놀레드가 없는 배지가 필요한 이유는 무엇입니까?

두 가지 주요 이유:
1. 호르몬 효과: 페놀 레드는 스테로이드 호르몬(특히 에스트로겐)의 효과를 모방하여 호르몬에 민감한 세포를 사용하는 실험을 방해할 수 있습니다.
2. 탐지 방해: 페놀레드의 형광 특성은 유세포분석과 같은 검출 방법을 방해할 수 있습니다.

9. 공통 매체 구성 요소의 기능은 무엇입니까?

NaHCO₃ (중탄산나트륨): 인큐베이터 내의 pH를 안정적으로 유지하기 위해 CO₂로 완충 시스템을 형성합니다.
나트륨 피루브산: 세포의 대체 탄소원으로 작용합니다(포도당이 부족할 때). 일반적인 최종 농도는 다음과 같습니다. 1mM.
헤페스: 특히 CO₂ 인큐베이터 환경 외부에서 추가적인 pH 안정화를 제공하는 강력한 화학 완충액입니다. 일반적인 최종 농도는 다음과 같습니다. 25mM.
페놀 레드: 역할 pH 지시약 (빨간색 = 중성 ~7.4, 노란색 = 산성, 보라색 = 알칼리성).
L-글루타민: 세포에 필수적인 아미노산으로, 에너지 대사와 단백질 합성에 관여합니다. 용액에서 불안정함 그리고 냉동 보관해야 합니다 - 20 ° C일반적으로 사용 직전에 배지에 첨가합니다. 일반적인 최종 농도는 다음과 같습니다. 2mM. 글루타민이 보충된 배지는 4°C에서 XNUMX시간 이상 보관할 경우 재보충해야 합니다. 2 주.