핵산 추출 과정

핵산 추출은 분자 생물학 및 진단 테스트의 기본 단계로, 연구원과 의료 전문가가 다운스트림 분석을 위해 다양한 생물학적 샘플에서 DNA 또는 RNA를 분리할 수 있도록 해줍니다. 핵산 추출 과정의 개요는 다음과 같습니다.

샘플 수집: 이 과정은 표적핵산이 포함된 생물학적 시료를 수집하는 것부터 시작됩니다. 샘플에는 특정 용도에 따라 혈액, 조직, 타액, 면봉, 소변 또는 기타 체액이 포함될 수 있습니다.

샘플 용해: 채취된 검체를 용해시켜 세포를 깨뜨려 핵산을 방출시킵니다. 세제, 카오트로픽제 또는 효소가 포함된 용해 완충액은 일반적으로 세포막을 파괴하고 단백질을 분해하여 핵산에 접근하는 데 사용됩니다.

핵산 결합: 핵산이 용해물로 방출되면 실리카 막이나 자기 비드와 같은 고체상 매트릭스에 선택적으로 결합해야 합니다. 결합 매트릭스의 선택은 샘플 유형, 핵산 유형(DNA 또는 RNA) 및 다운스트림 애플리케이션과 같은 요인에 따라 달라집니다.

세탁: 결합 후 고체상 매트릭스를 세척하여 단백질, 지질, 기타 세포 찌꺼기 등의 오염물질을 제거합니다. 세척 단계는 핵산을 정제하고 후속 분석에서 배경 소음을 줄이는 데 도움이 됩니다.

용출: 정제된 핵산은 저염 완충액이나 물을 사용하여 고체상 매트릭스에서 용출됩니다. 용출을 통해 핵산이 깨끗한 용액으로 방출되어 PCR(중합효소 연쇄 반응), 서열 분석 또는 기타 분자 분석과 같은 다운스트림 응용 분야에 사용할 수 있습니다.

품질 관리: 추출된 핵산은 농도, 순도, 무결성을 평가하기 위해 품질 관리 단계를 거칠 수 있습니다. 정량화를 위한 일반적인 방법에는 UV 분광학(예: 분광 광도계 사용) 또는 형광 측정법(예: 형광 기반 분석 사용)이 포함됩니다. 순도는 특정 파장(예: DNA의 경우 A260/A280 비율, RNA의 경우 A260/A230 비율)에서 흡광도 비율을 측정하여 평가하는 경우가 많습니다. 무결성은 겔 전기영동 또는 모세관 전기영동으로 평가할 수 있습니다.

스토리지: 정제된 핵산은 용도와 안정성 요건에 따라 단기 또는 장기 보관 시 적절한 온도(-20°C 또는 -80°C)에서 보관할 수 있습니다.

핵산 추출 프로토콜은 특정 샘플 유형, 원하는 핵산 유형, 다운스트림 애플리케이션, 사용 가능한 장비 또는 키트에 따라 달라질 수 있다는 점에 유의하는 것이 중요합니다. 연구원과 실험실 직원은 신뢰할 수 있는 다운스트림 분석을 위해 추출된 핵산의 높은 수율, 순도 및 무결성을 달성하기 위해 추출 프로토콜을 최적화하는 경우가 많습니다. 또한 특히 처리량이 많은 실험실 환경에서 추출 프로세스를 간소화하고 표준화하기 위해 자동화 및 키트 기반 접근 방식이 점차 보편화되었습니다.

인플루엔자 바이러스 핵산 추출 과정

인플루엔자 바이러스에 대한 핵산 추출 프로세스는 일반적으로 일반 핵산 추출과 유사한 작업 흐름을 따르며, 바이러스 및 처리되는 샘플에 대한 몇 가지 구체적인 고려 사항이 있습니다. 인플루엔자 바이러스의 핵산 추출 과정에 대한 개요는 다음과 같습니다.

샘플 수집: 비인두 면봉, 비강 세척제, 인후 면봉 또는 호흡기 분비물은 일반적으로 인플루엔자 감염이 의심되는 개인으로부터 수집됩니다.

샘플 비활성화: 생물학적 안전성을 보장하고 바이러스 전파를 방지하기 위해 수집된 샘플을 적절한 바이러스 비활성화 완충액 또는 열처리로 처리하여 추출용 핵산을 보존하면서 바이러스를 감염되지 않게 만들 수 있습니다.

샘플 용해: 비활성화된 샘플을 용해하여 바이러스 RNA를 방출합니다. 세제, 카오트로픽제 또는 효소가 포함된 용해 완충액은 바이러스 외피를 파괴하고 바이러스 핵산을 방출하는 데 사용됩니다.

핵산 결합: 용해 후 바이러스 RNA는 일반적으로 카오트로픽 염과 에탄올을 포함하는 과정을 통해 실리카 막이나 자성 구슬과 같은 고체상 매트릭스에 선택적으로 결합됩니다. 이 단계에서는 바이러스 RNA의 정제 및 농축이 가능합니다.

세척: 결합된 바이러스 RNA가 포함된 고체상 매트릭스를 세척하여 단백질, 세포 잔해 및 다운스트림 응용 프로그램을 방해할 수 있는 억제제와 같은 오염 물질을 제거합니다.

용출: 정제된 바이러스 RNA는 저염 완충액 또는 물을 사용하여 고체상 매트릭스에서 용출됩니다. 용출을 통해 바이러스 RNA가 깨끗한 용액으로 방출되어 인플루엔자 바이러스 검출 및 특성화를 위한 역전사 중합효소 연쇄반응(RT-PCR)과 같은 다운스트림 분석이 가능해집니다.

품질 관리: 추출된 바이러스 RNA는 UV 분광학, 형광측정 또는 RT-PCR과 같은 방법을 사용하여 농도, 순도 및 무결성을 평가하기 위해 품질 관리 단계를 거칠 수 있습니다.

보관: 정제된 바이러스 RNA는 용도 및 안정성 요구 사항에 따라 단기 또는 장기 보관을 위해 적절한 온도(-20°C 또는 -80°C)에서 보관할 수 있습니다.

인플루엔자 바이러스의 핵산 추출 과정은 특정 샘플 유형, 바이러스 양, 사용된 검출 방법, 사용 가능한 장비 또는 키트와 같은 요인에 따라 달라질 수 있다는 점에 유의하는 것이 중요합니다. 또한 검체 처리 중 바이러스 전파를 방지하기 위해 생물안전 주의사항을 엄격히 준수해야 합니다. 인플루엔자 바이러스 검출을 위해 특별히 설계된 자동 추출 플랫폼과 상업용 추출 키트는 일반적으로 임상 및 연구 실험실에서 추출 프로세스를 간소화하고 표준화하는 데 사용됩니다.